Определение пола микроскопированием экзувия

Модератор: notami

Ответить
Аватара пользователя
tmkng
личинка
личинка
Сообщения: 155
Зарегистрирован: Чт июл 21, 2011 02:11
Сколько ног у паука?: 8
Откуда: Звенигород, МО

Определение пола микроскопированием экзувия

Сообщение tmkng » Ср июл 04, 2012 15:48

 
Небольшое предисловие. У вас есть паук, и вам страсть как хочется узнать его пол. Не будем затрагивать преследуемые цели, как то определить как можно раньше, и слить самцов, по дефолту, вы - порядочный продавец, или просто любитель, у которого есть свободных полчаса, терпение, и совсем немного необходимых вещей.

Что же нам понадобится? Конечно, в первую очередь потребуется микроскоп, но какой именно микроскоп нам потребуется? Я считаю, что для определения на ранних линьках нужен обычный монокуляр, я, например, использую биолам-70, отремонтированный мною самим, хотя пойдёт и любой другой, как детский, как простой прямой школьный, как и лабораторный. Различие между школьным и лабораторным, в данном случае, состоит в наличии/отсутствии конденсора и диафрагмы, которые дают возможность ставить свет по Кёллеру. Для определения пола понадобится диапазон увеличения от x56 до x280. Такое увеличение даст практически любой монокуляр, за исключение совсем детских. У нас есть микроскоп. А теперь главный вопрос, ответ на который и будет главной целью этой статьи. Как мы будем готовить экзувий для микроскопирования? Есть два способа: временный или тотальный (постоянный) препараты. Я думаю, что при наличии у вас микроскопа, проблемой не станут ни предметные, ни покровные стёкла, так как на всем остальным задумываться вообще не придётся. Итак, что нам понадобится? Вот краткий список: предметные и покровные стёкла, чашка Петри (можно заменить любой пластиковой или стеклянной ёмкостью адекватного размера), препаровальные иглы (можно сделать самостоятельно, для этого надо расплавить задний конец пустого стержня от ручки и вставить в него, пока он не застыл, швейную иглу), скальпель (можно пользоваться лезвием бритвы с заклеенной изолентой стороной), пинцет (чем он меньше и тоньше, тем лучше), пипетка (для нанесения красителя на окрашиваемый препарат), стаканчики (я пользуюсь пластиковыми лаб. стаканами, так как они не бьются, в отличие от своих стеклянных родственников), этанол (понадобится в любом случае), и краситель фуксин, метиленовый синий, или бриллиантовый зелёный (фуксин можно достать в аптеке, попросив фукорцин, это конечно не чистый фуксин, там много чего ещё, в особенности резорцина, но чистый он (фуксин) особенно то, и не нужен), глицерин, ксилол (желателен, нужен для обезвоживания препарата). Это минимум. Для того чтобы сделать тотальные препараты ещё понадобятся: глицерин, желатин и фенол (для приготовления глицерин-желатиновой смеси, фенол можно заменить тимолом, насколько я знаю, хотя сам использую фенол), либо канадский бальзам; ксилол, и зажигалка (понадобится чтобы плавить глицерин-желатин), стироловый клей. Всё. Дальше, собственно, сама методика. Я снабжаю её фотографиями самого процесса, экзувий C. schioedtei L1. Сегодня он перелинял во вторую линьку (инстар).
Изображение Изображение Изображение

1. Мы забрали экзувий. Насчёт времени в течении которого он ещё пригоден для расправления, есть разные мнения, я использовал, почти всегда, для расправления 80% этанол, возможно, он слишком крепкий, и хорошо получалось расправить только лишь шкуры одной или двухдневной давности, более старые очень часто при расправлении просто рвались. Есть мнение, что при расправлении в моющем средстве они расправляются лучше, возможно так оно и есть. Сегодня я как раз попробовал расправить участок абдомена в стаканчике с раствором моющего средства, для этого у шкуры были обрезан 3-4 пары ног, и я, удерживая её пинцетом за остальные конечности, какое то время продержал её в растворе, часто встряхивая и прополаскивая, а потом уже разворачивал иглами, и она, несмотря на L1, хотя, всё таки, для честности, схиёдтеи на первой линьке весьма не маленькие. Теперь, когда экзувий расправлен остаётся только отрезать скальпелем интересующую нас часть опистосомы (я обычно отрезаю по линиям, образованными верхним карем верхней пары лёгких, и нижним карем нижней пары лёгких)
Изображение

2. Теперь нужно окрасить экзувий. Есть некоторая идея, что экзувий можно приклеивать к предметному стеклу при помощи смеси яичного белка и глицерина, или же использовать раствор казеинового клея в дистилляте, окуная в него экзувий и вылавливая его на обезжиренное стекло. Я этим делом не маюсь, хотя это и могло бы быть полезным. Что же качается выбора красителя, то тут каждый выбирает сам, так как, ИМХО, никакой разницы нет. В зависимости от размера экзувия можно использовать разное количество, я, в большинстве случаев использую 0,4-0,6 мл, для этого у меня есть градуированная пипетка на 2 мл, куда ртом засасывается фукорцин.

3. После того, как экзувий залит красителем, нужно, аккуратно, постоянно контролируя степень окрашенности экзувия, приливать спирт, до вымывания красителя. Затем, можно промыть экзувий смесью этанол-ксилол, а затем уже и чистым ксилолом, к слову, у меня закончился чистый ксилол, и я промывал уже ацетоном.
Изображение

4. Здесь уже надо думать что нам надо, мы можем сделать временный препарат, заключив экзувий в глицерин, для большинства наверное самый актуальный вариант, либо заключить в канадский бальзам, либо, что проще в глицерин-желатин, так как канадский бальзам нужен как иммерсионное масло. Глицерин-желатин приготовляют: растворив в 100 см3 на водяной бане или в горячей воде 10 г желатина в листах, к раствору добавляют 25 см3 глицерина и 0,1 г тимола, растворив последний в воде, или несколько капель фенола, опять же, растворённого в воде, это для сопротивления плесени, так собственно делаю я. Все перемешивают и сливают в бюкс. Я храню его в холодильнике. Собственно, вот сам глицерин-желатин.
Изображение

5а. Тут всё просто, капаем на покровное стекло, предварительно обезжиренное, каплю глицерина, и опуская его сначала одним ребром, покрываем наш экзувий (так количество пузырьков воздуха будет меньше). Убираем лишний глицерин и микроскопирум препарат.

5б. Тут сложнее, надо взять кусочек глицерин-желатина, положить его на покровное стекло, держа покровное стекло пинцетом, и расплавить зажигалкой, после этого положить его на экзувий так же, как и для глицерина, затем аккуратно убрать оставшиеся пузырьки воздуха, аккуратно надавливая на покровное стекло, я часто просто накрываю покровное стекло листком фильтровальной бумаги, а сверху ставлю гирьку на 50 гр. Если пузырьки воздуха остались, ничего, надо положить маленький кусочек рядом с краем стекла, нагреть его, чтобы он расплавился, он сам затечёт под покровное стекло. Затем, препарат можно положить в холодильник, на несколько минут. После смываем излишки глицерин-желатина, под проточной холодной водой. Можно окантовать покровное стекло раствором пенополистирола в ацетоне или ксилоле, при испарении растворителя он затвердеет, превратившись в стирол. Его можно аккуратно обрезать, оставив своеобразную рамочку. Так можно увеличить срок хранения тотального препарата во много раз.
Сам я так раньше делал, но сейчас клей пришёл в негодность, а ксилол закончился, да и особого смысла в этом и нет. С краю можно приклеить этикетку с названием вида и возрастом паука.

6. Микроскопируем препарат, начиная с самого маленького увеличения. Смотрим в область эпигастральной борозды, ровно посередине между лёгкими... И тут мне придётся раскрыть главную тайну, о которой все догадывались, читая эту статью. Конечно, на первой линьке вы ничего не увидите, да, это печально. Нормальный результат можно получить начиная с 3-4 линьки, в зависимости от размеров паука. Но отчаиваться не надо, этот метод действительно работает, я, например определил самку P. cambridgei на 3 линьке. Сейчас же ей уже 9 линек. Можно строить догадки, я вот, например, надеюсь что вот эти два утолщения - зачатки семяприёмников (возможно, правильнее было бы сказать рецептакул, так как семяприёмник - синоним самого понятия сперматеки), они у C. schioedtei, как известно, раздельные. Смотрите картинку ниже, только осторожно, она очень большая, но иначе ничерта не видно.
Изображение

7. Ну а теперь вы можете положить тотальный препарат в коробочку для тотальных препаратов. :)
Изображение

Привет.
Последний раз редактировалось tmkng Пт авг 03, 2012 22:26, всего редактировалось 3 раза.
Science is interesting, and if you don't agree you can fuck off.
Аватара пользователя
Viss
Нимфа
Нимфа
Сообщения: 271
Зарегистрирован: Вс мар 04, 2012 22:12
Сколько ног у паука?: 8
Откуда: Донецк

Re: Определение пола микроскопированием экзувия

Сообщение Viss » Ср июл 04, 2012 15:56

 
Все очень классно написано. Вот только
градуированная пипетка на 2 мл, куда ртом засасывается фукорцин.
Я бы все же использовал резиновую грушу, а то можно потом с красным ртом ходить :)
Самое страшное, когда страх перестает быть просто эмоцией и становится чувством...
Аватара пользователя
tmkng
личинка
личинка
Сообщения: 155
Зарегистрирован: Чт июл 21, 2011 02:11
Сколько ног у паука?: 8
Откуда: Звенигород, МО

Re: Определение пола микроскопированием экзувия

Сообщение tmkng » Ср июл 04, 2012 16:14

 
Привычка, да и фукорцин, не такой уж и ужасный, например, есть мнение, что в лабораторной практике СССР первой половины XX века, это было вполне распространённая практика. Да и сейчас не все пользуются грушами. Но, ведь никто же не говорит засасывать ртом дымящие растворы галогеноводородов, от которых зубы улетают на юг... Не говоря уже, про какую-нибудь другую страшную неорганику, или ещё хуже органику. Хотя, конечно, претензия абсолютно обоснованная. :)
Science is interesting, and if you don't agree you can fuck off.
Аватара пользователя
Rachel
Гиппер-кипер
Гиппер-кипер
Сообщения: 4066
Зарегистрирован: Вс мар 27, 2011 19:30
Сколько ног у паука?: 8
Откуда: Беларусь, Минск
Контактная информация:

Re: Определение пола микроскопированием экзувия

Сообщение Rachel » Ср июл 04, 2012 17:15

 
Честно сказать, не думаю, что определение пола на столь мелких линьках имеет смысл. После 3-4 - еще ладно. Но на 1-ой как-то слишком отчаяно пытаться это делать. А если речь идет о мелких наземниках, то тут вообще проще выкинуть шкуру и не портить себе нервы :)
За статью спасибо, наконец-таки будет куда ссылаться =)
Но лично я предпочитаю возиться со шкурами от нескольких сантиметров по телу. =)
Ищите в вк, тут не бываю.
Аватара пользователя
tmkng
личинка
личинка
Сообщения: 155
Зарегистрирован: Чт июл 21, 2011 02:11
Сколько ног у паука?: 8
Откуда: Звенигород, МО

Re: Определение пола микроскопированием экзувия

Сообщение tmkng » Ср июл 04, 2012 17:22

 
Конечно, всё так и есть, L1 был взят просто для демонстрации того, что у этого способа, теоретически, нет никакого ограничения на возраст.
Science is interesting, and if you don't agree you can fuck off.
Аватара пользователя
micro
Главный модератор
Сообщения: 8793
Зарегистрирован: Чт июн 02, 2011 08:54
Сколько ног у паука?: 8
Откуда: Санкт-Петербург

Re: Определение пола микроскопированием экзувия

Сообщение micro » Ср июл 04, 2012 18:13

 
Я склоняюсь к тому, что бинокулярный микроскоп удобнее, можно даже самый простой, например МБС-1. Когда изображение объемное, легче отличить случайную складку от чего то более интересного :) Да и расправляться под ним шкуру очень удобно. Единственный минус-для шкурок меньше 1 см маловато увеличение х100 (даже чуть меньше).
Аватара пользователя
tmkng
личинка
личинка
Сообщения: 155
Зарегистрирован: Чт июл 21, 2011 02:11
Сколько ног у паука?: 8
Откуда: Звенигород, МО

Re: Определение пола микроскопированием экзувия

Сообщение tmkng » Ср июл 04, 2012 18:29

 
Вы скорее всего имеете ввиду стереоскопический бинокулярный микроскоп, здесь я могу поспорить, так как он более полезен всё же не для определения пола, так как экзувий сам по себе имеет незначительную толщину, и готовить из него микропрепараты одно удовольствие, но скорее для определения его таксономического положения. К примеру рассматривать максиллы, несомненно куда более удобнее во что-то вроде МБС-9, чем в БИОЛАМ. Что касается монокуляра, конечно, он не особо удобен, да и портит зрение, но, в таком случае, ничего, в принципе, не мешает купить бинокулярную насадку. Вот хоть на мой БИОЛАМ, для него существует родная бинокулярная насадка АУ-12. Преимущества её, конечно, перед монокуляром очевидны, но я, по сути, не так часто работаю, чтобы испытывать особый дискомфорт, который бы стал достаточной мотивацией для её приобретения.
Science is interesting, and if you don't agree you can fuck off.
Аватара пользователя
Rachel
Гиппер-кипер
Гиппер-кипер
Сообщения: 4066
Зарегистрирован: Вс мар 27, 2011 19:30
Сколько ног у паука?: 8
Откуда: Беларусь, Минск
Контактная информация:

Re: Определение пола микроскопированием экзувия

Сообщение Rachel » Ср июл 04, 2012 18:35

 
А я со своей стороны настаиваю на USB микроскопах =) Даже мой галимый Intel Play QX3 подходит для этих целей ^__^ Потом, как-нибудь, соберусь с силами и средствами, и закажу что-нибудь с более качественным изображением =)
Ищите в вк, тут не бываю.
Аватара пользователя
tmkng
личинка
личинка
Сообщения: 155
Зарегистрирован: Чт июл 21, 2011 02:11
Сколько ног у паука?: 8
Откуда: Звенигород, МО

Re: Определение пола микроскопированием экзувия

Сообщение tmkng » Ср июл 04, 2012 18:58

 
Я думаю, что на самом деле для определения пола подойдёт вообще любой микроскоп, с маломальским увеличением, так как гонка за ним, даёт возможность уменьшить минимальный возраст определения пола, при том, что вероятность ошибиться растёт именно с уменьшением возраста паука, потому, считаю что, для обычных любителей тип микроскопа особого значения не имеет. Статья же писалась специально для оптических микроскопов, со всей спецификой такой работы.

Позднее здесь буду публиковать фотографии экзувиев следующих линек этого паука, чтобы можно было увидеть как и развитие сперматеки, так и проверить оказался ли я прав на счёт пола. Думаю что и на первых линьках можно определять пол, но для этого надо иметь не мало опыта.
Science is interesting, and if you don't agree you can fuck off.
Аватара пользователя
micro
Главный модератор
Сообщения: 8793
Зарегистрирован: Чт июн 02, 2011 08:54
Сколько ног у паука?: 8
Откуда: Санкт-Петербург

Re: Определение пола микроскопированием экзувия

Сообщение micro » Ср июл 04, 2012 19:48

 
tmkng писал(а):Статья же писалась специально для оптических микроскопов, со всей спецификой такой работы.
Статью прочитал с интересом, спасибо! Вот только так заморачиваться для препаратов, которые не собираешься хранить, смысла не вижу. Опишу свой вариант: беру шкурку, кладу на стекло, беру зубочистку, мокаю её в Фейри, потом, держа её над шкуркой, капаю на неё из шприца несколько капель воды, вода стекает, захватывая с собой Фейри и смачиват шкурку. Через пару минут, а то и сразу же, если свежая шкурка (1-3 дня примерно, но чем свежее, тем лучше), обрезаю шкуру так же, как советовали в статье выше. Кладу стекло под микроскоп и двумя швейными иглами расправляю шкуру, под микроскопом это делать очень удобно (опять же плюс бинокулярного стереоскопического микроскопа с большим расстоянием между столиком и объективом) и шансы на успех велики, даже с очень мелкими шкурками. Как расправил, обламываю зубочистку и макаю её в зеленку (другого красителя просто нет пока), обломленая берет больше зеленки, и переношу каплю зеленки на шкурку. Через 3-5 минут кладу стекло на салфетку и смываю зеленку струёй из шприца. После сразу же рассматриваю под микроскопом. Иголочками можно манипулировать шкуркой и сперматекой, при её наличии :) После определения лезвием ножа скидываю шкурку в мусор. На всю подготовку и определение уходит минут 10.
Как выше писали, с мелкими шкурами не стоит сильно заморачиваться, хотя можно расправить и что-то разглядеть, но опыта определить по этому "что-то" лично мне пока не хватает. При размерах тела от 1-1,5 см уже можно пытаться определять.
Аватара пользователя
Ann
Знаток
Знаток
Сообщения: 1621
Зарегистрирован: Пн ноя 08, 2010 19:40
Сколько ног у паука?: 8
Откуда: Москва, Ясенево
Контактная информация:

Re: Определение пола микроскопированием экзувия

Сообщение Ann » Ср июл 04, 2012 23:17

 
Вов, если развернута шкура 1 см, то почему нет? 100х увеличение пойдёт- изображение качественнее( не у всех наверн, но сужу по-своему) и почти все дешёвые микроскопы способны на это
Да и неужели ради интереса или тренировки не захочешь попытаться определить?)
Продай паука, заведи кота,будь няшкой
Аватара пользователя
micro
Главный модератор
Сообщения: 8793
Зарегистрирован: Чт июн 02, 2011 08:54
Сколько ног у паука?: 8
Откуда: Санкт-Петербург

Re: Определение пола микроскопированием экзувия

Сообщение micro » Чт июл 05, 2012 00:17

 
Ann писал(а):Да и неужели ради интереса или тренировки не захочешь попытаться определить?)
Регулярно пытаюсь и тренируюсь :) Не все шкурки разворачиваю, вот за сегодня их 8 штук, просто времени нет, но парочку сейчас разверну, как раз около 1 см по телу паучки, шкурки, естественно, меньше.

P.S. Вот сейчас попробовал, маршали не знаю, какая линь, но мелкий, руфилата л2. Маршали, похоже, самка. Руфилата вот я вообще фиг знает, не уверен ни туда ни сюда, похожа на самца, но что то смущает. В общем, 100% уверенности нет.
Мне вот нравится определять по шкуркам сантиметра в три размером, да свеженькая когда, ещё мокрая забрана :roll:
Последний раз редактировалось micro Чт июл 05, 2012 00:40, всего редактировалось 1 раз.
Mike_Doc
Нимфа
Нимфа
Сообщения: 304
Зарегистрирован: Пт ноя 11, 2011 00:16
Сколько ног у паука?: 8
Откуда: Беларусь

Re: Определение пола микроскопированием экзувия

Сообщение Mike_Doc » Чт июл 05, 2012 00:22

 
Вопросов нет, можно определить пол и на стадии линьки паучка L1 в L2, но далеко не у всех видов и при условии отбора нетронутого экзувиия. Вопрос в другом - как европейцы с большой точностью определяют пол L1? Особенно у дорогостоящих видов!
Аватара пользователя
Insulin
Нимфа
Нимфа
Сообщения: 442
Зарегистрирован: Пт май 05, 2006 00:29
Сколько ног у паука?: 666
Откуда: Красногорский р-он, п. Путилково
Контактная информация:

Re: Определение пола микроскопированием экзувия

Сообщение Insulin » Чт июл 05, 2012 08:16

 
Mike_Doc писал(а):как европейцы с большой точностью определяют пол L1?
я думаю много и давно этим занимаются. глаз намётан. например, у меня мать по форме клюва и гребню у суточного цыплёнка с большой вероятностью могла определить пол, (не знаю как сейчас, старая уже) :) но для этого она более 40 лет проработала бригадиром выращивания на Красногорской птицефабрике... :D
В чужой террариум со своим удавом не ходят!
Изображение
Аватара пользователя
tmkng
личинка
личинка
Сообщения: 155
Зарегистрирован: Чт июл 21, 2011 02:11
Сколько ног у паука?: 8
Откуда: Звенигород, МО

Re: Определение пола микроскопированием экзувия

Сообщение tmkng » Вс июл 15, 2012 17:10

 
Mike_Doc писал(а):Вопрос в другом - как европейцы с большой точностью определяют пол L1? Особенно у дорогостоящих видов!
A mon avis, можно лишь приблизительно определить, рассматривая угол между верхними лёгкими, вкупе с формой эпигастральной борозды, и, уже, разбивая на группы наиболее похожих по признакам пауков. Естественно, при наличии бинокулярной или препаровальной лупы. Но даже и в этом случае ни о какой точности говорить не приходится. Остальные же способы вроде различий в размере, окрасе, и прочих формах хелицер, доверия, по-моему, не вызывают.
Science is interesting, and if you don't agree you can fuck off.
Ответить